张 轶，何 宏，刘文华，魏 勇，王晨豫，齐亚银*
1 天澳牧业有限公司，新疆奎屯 833200 2 新疆天润乳业股份有限公司，新疆乌鲁木齐 830000 3 石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000
副结核病（Paratuberculosis）又称副结核肠炎，是由副结核分支杆菌（Mycobacterium avium subsp.pamtuberculosis，MAP）引起的一种慢性传染病，由于发病初期症状不典型，因此易与其他腹泻性疾病混淆。该病呈世界性分布，主要感染牛、羊、鹿等反刍动物，且牛的易感程度远大于羊[1]。
副结核病在2岁左右的牛群中易得，发病中后期时临床症状明显，主要表现为卡他性肠炎及顽固性腹泻，患病牛只极度消瘦，生产性能损失严重。解剖可见肠黏膜高度增厚（3～20倍），形成皱襞且皱襞间含有大量抗酸杆菌成堆状。
在检测方面，实验室常用血清学ELISA试验进行大批量样品检测，而小批量常采用抗酸染色对疑似感染牛群粪便进行镜检。因其为胞内寄生菌，故抗生素在治疗中无明显效果，只能缓解临床症状，无法彻底根除。虽无有效的药物治疗，但现已有用灭活苗作预防的报道[2]。
2019年，新疆奎屯部分规模化牧场顽固性腹泻牛只增多，检测病原为副结核分支杆菌。随后连续3年通过血清学对7 个规模化奶牛场副结核病进行监测，确定了每年度抗体总阳性率及各个牧场3 年间副结核的抗体变化，为规模化牧场副结核病的防控提供了科学依据。
1.1 材料
1.1.1 待检血清
待检血清来源于2019—2021年新疆奎屯地区7 个规模化奶牛场（表1）。
表1 2019—2021年不同牧场血清样本统计表 单位：头
1.1.2 主要试剂
牛副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒，IDEXX公司。
1.1.3 主要仪器
离心机，Sigma公司；
酶标仪，美国Bio-Rad公司；
移液器，赛默飞公司。
1.2 方法
按照试剂盒说明书进行样品稀释、孵育抗原结合、加酶标抗体、加底物、加终止液，在酶标仪中读取OD值，根据公式计算结果，使用统计软件分析数据。
对所有血清进行ELISA检测后计算统计，结果表明：3年间副结核抗体阳性率分别为6.55%（636/9 715）、6.80% （705/10 375）及5.23%（615/11 753），见表2。同时对各个牧场3年间进行统计，发现大部分牧场抗体阳性率呈现先升后降的趋势，见表3。
表2 2019—2021年每年度副结核抗体总阳性率统计表
表3 2019—2021年各年度不同牧场副结核抗体阳性率统计表
奶牛副结核病危害巨大，因该病具传染性且无特效药，一旦患病使牛只生产性能逐渐丧失，外加治疗成本会给牧场造成极大经济损失。因此，通常需采取检疫+淘汰的方法严格把控，控制该病的扩散。
对2019—2021年每年抗体总阳性率进行分析，呈现先升后降的趋势，这与牧场对副结核病的防控措施有很大关系。在2019年间通过抗体检测在7 个牧场中已然发现该病的存在，但由于对其认知不足，并未采取有效措施。以G场为例，在2019年的抗体阳性率很低，但在2020年却由0.94%突增到8.12%，正是由于对该病未引起足够重视所导致。因此在2021年加强了对该病的检测与阳性牛只的淘汰，故而大部分牛场抗体阳性率均有不同程度的下降，而对于抗体水平未下降的A场与F场，可能由于生产管理方面存在问题，因而并未降低阳性率。
由于该病的广泛性，国内其他地区对副结核的抗体水平检测也有相应报道。张丽媛等[3]对新疆北疆地区某规模化奶牛场副结核病进行调查，抗体阳性率为17.44%（45/258）。陈志远等[4]在2018年2月至2019年11月对山东省9 个地区进行调查，总体抗体阳性率为17.80%（579/3 253），2019年阳性率22.31%（441/1 976）高于2018年阳性率11.24%（138/1 227），上述结果远高于本试验结果，说明所涉地区副结核感染较为严重。
努尔麦麦提·麦麦提敏[5]对新疆南疆不同地区7 个规模化牧场进行调查，平均抗体阳性率为6.87%（65/946）。赵怡雯等[6]对大连规模化牧场奶牛副结核进行抗体检测，整体阳性率从2018年的8.04%下降到2019年的2.07%，2020年出现反弹。师庆伟等[7]对黑龙江省不同地区9 个规模化牧场进行副结核抗体检测，发现每个牛场均检出血清阳性牛，副结核阳性场感染率100%；
2018年样品平均阳性率4.74%，2019年样品平均阳性率4.31%，相较之下说明国内大部分地区副结核抗体阳性率在10%以下。
总体分析，说明检疫+淘汰的措施起到较好的效果。若想要进一步淘汰阳性牛只降低阳性率，则应配合其他检测方式。一般来说，ELISA抗体检测阳性均为副结核感染中后期，此阶段阳性牛只已通过粪便等其他形式进行排菌，进而感染健康个体。若此时淘汰对于牧场成本过高，且严重污染环境及影响健康牛只。γ干扰素检测可进行早期揭发已被感染副结核但ELISA检测阴性的牛只，通过该方法可有效判断牛只是否被副结核分支杆菌感染。
本试验通过对2019—2021年新疆奎屯7 个规模化牧场奶牛副结核病的调查，明确了牧场副结核的感染情况，同时配合科学的防控措施，有效降低了副结核抗体阳性率，为规模化牧场副结核病的防控提供了理论依据。
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